Кількісне визначення гліцину в лікарських формах за реакцією з 2,3-дихлор-1,4-нафтохіноном

Abstract

Оскільки популярність ноотропів продовжує набирати оберти, фармацевтичний ринок цих лікарських препаратів невпинно розширюється, перед системою охорони здоров’я постає значна проблема щодо своєчасного, експресного та належного контролю якості лікарських засобів. Так, фармакопея Сполучених Штатів та Британська фармакопея пропонують титриметричний спосіб кількісного визначення гліцину в субстанції, а саме ацидиметрію у неводному середовищі з індикаторним (розчином кристалічного фіолетового) або потенціометричним фіксуванням кінцевої точки титрування [1, 2]. В джерелах літератури описано спектрофотометричні методи аналізу амінокислот із первинною аміногрупою на основі їх взаємодії з розчинами о-фталевого альдегіду, за присутності 2-меркаптоетанолу, нінгідрину [3], 2,4,6-тринітробензену. Розроблено непрямий метод визначення амінокислот у субстанції за реакцією з купрум(ІІ) фосфатом. Надається інформація щодо спектрофотометричних методик, які ґрунтуються на утворенні забарвлених сполук із розчинами хлоранілу (тетрахлорхінон), флуоранілу (тетрафлуорхінон), 1,2,4-тригідроксоанрахінону [4], п-бензохінону, натрієвої солі 1,2-нафтохінон-4-сульфокислоти [5]. Існує метод спектрофотометричного визначення у видимій ділянці спектра деяких амінокислот (зокрема гліцину) на основі їх взаємодії (як донорів електронів) з розчином 7,7′,8,8′-тетраціанохінодиметану (π-акцептор) у середовищі ацетонітрилу за температури 70 °С [6]. Источники литературы предлагают большое количество как титриметрических, так и оптических методов анализа глицина. Некоторые из описанных методов требуют недоступных реагентов, предложены лишь для субстанций, другие – сложны в исполнении либо недостаточно чувствительны. Поэтому актуальность разработки нового, простого, чувствительного, валидного метода анализа глицина не вызывает сомнений. Целью работы была разработка новой спектрофотометрической методики определения глицина по реакции с 2,3-дихлор-1,4-нафтохиноном в лекарственных формах. Объекты исследования – лекарственные препараты: порошок в пакетиках (саше) Медихронал-Дарница (ЧАО «Дарница», Украина) по 7,0 г глицина; таблетки по 0,10 г глицина – Глицисед (Корпорация «Артериум», Украина) и Глицин (ООО «МНВК «Биотики»», Россия); капсулы по 0,50 г глицина Доппельгерц актив Глицин + В-витамины (Queisser Pharma Gmbh & Co, Германия). Исследования проводили на спектрофотометре Specord 200 (Германия). Общая методика количественного определения глицина: точную навеску глицина (0,1200–0,2000 г) помещают в мерную колбу объемом 25,00 мл, растворяют в 7,00 мл воды очищенной, доводят ДМФА до метки, перемешивают. 1,00 мл полученного раствора переносят в мерную колбу объемом 25,00 мл, добавляют 2,50 мл 1%-го раствора 2,3-дихлор-1,4-нафтохинона, перемешивают. Полученную реакционную смесь нагревают на водяной бане (15 мин, 95 °С), охлаждают, доводят ДМФА до метки. Оптическую плотность измеряют на фоне компенсационного раствора, который не содержит исследуемого вещества, при 470 нм. Реакция достаточно чувствительна, определяемый минимум составляет 3,20 мкг/мл. Разработана чувствительная, экономичная, удобная спектрофотометрическая методика количественного определения глицина в 4 лекарственных препаратах. Доказано соответствие разработанной методики требованиям ГФУ согласно таким основным валидационным характеристикам – линейность (коэффициент корреляции r = 1,000), точность, правильность, диапазон применения (77–123%), робастность. Полученные статистические показатели свидетельствуют о достаточно высокой точности и корректности предложенной методики, а также возможности ее применения в лабораториях контроля качества лекарственных средств и ОТК химико-фармацевтических предприятий. Glycine has been reported to be determined by different techniques including titrimetric methods, VIS spectrophotometry. Some of the proposed methods require inaccessible reagents, others – difficult in execution or offered only for substances. That is why, feasibility of developing new, simple, valid methods for the glycine quantitative determination in medical forms is not in doubt. This paper presents a new, simple and accurate VIS spectrophotometric method for determining of glycine in pharmaceutical formulation using 2,3-dichlor-1,4-naphthoquinone as a reagent. Pharmaceutical preparations: capsules of Doppel Herz, 0,50 g (Queisser Pharma Gmbh & Co, Germany); powder in packets Medichronalum-Darnitsa, 7,00 g (Pharmaceutical company «Darnitsa», Ukraine); tablets of Glycin («Biotiki», Russia).and Glicised («Arterium», Ukraine), 0,10 g. Analytical balance (ABT-120-5DM); UV-VIS spectrophotometer (Specord 200); water bath (Memmert WNB 7-45). The aliquot part (0,1200‒0,2000 g) of the glycine is put into a 25,00 ml volumetric flask, add 7,00 ml water and filled to the mark with DMF. The amount of 1,00 ml of the resulted solution is poured into a 25,00 ml volumetric flask, then treated with 2,50 ml of 1% solution of the 2,3-dichlor-1,4-naphthoquinone and mixed up. A received solution is heated up for 15 minutes on the water-bath under temperature of 95 °С, then is cooled down and filled to the mark with the DMF. Absorbance of the test solution is measured at 470 nm against the background of the compensation solution that does not contain any test solution. Defined minimum calculated by common method is 3,20 mcg/ml. Experimentally determined glycine optimal reaction conditions with the 2,3-dichlor-1,4-naphthoquinone as the basis for the development of spectrophotometric methods for glycine quantitative determination in the 4 drug dosage forms. The analytical method was optimized and validated by establishing the linearity (in the range of 5,00‒8,00 mg/100 ml), the correlation coefficient (r = 1,000), precision and the accuracy. Thus, the peculiarity of the developed method consists in it’s enhanced sensitivity in comparison with other available methods of quantitative determination. The developed method is simple and useful for routine analysis of glycine in pharmaceutical formulations and in-process quality control.